El coprocultivo o examen coproparasitoscópico consiste en el cultivo de materia fecal. Es un método de diagnóstico microbiológico que permite identificar diferentes organismos causantes de enfermedades gastrointestinales.
FINALIDAD
Es indicado para el diagnóstico de ciertas afecciones del aparato gastrointestinal, especialmente aquellas infecciones provocadas por bacterias. Se lo utiliza para estudiar casos de diarrea severa, persistente o recurrente sin causas conocidas, y en caso de diarreas asociadas al consumo de antibióticos.
Medios de trasporte llenas de heces humanas para coprocultivos. Tapas Amarillas y azules para pruebas de parásitos, tapa roja para coprocultivos y tapa blanca para pacientes que han cogido la muestra ellos mismos
PROCEDIMIENTO
TOMA DE MUESTRAS
Se puede obtener la muestra recogiendo las heces en una bolsa plástica adosada a la taza del inodoro o utilizando equipos de recolección comerciales. En caso de bebés se puede adosar la bolsa al pañal. Una vez obtenida la muestra se debe colocarla en un recipiente estéril y derivarla al laboratorio lo más rápido posible.
TECNICA DE LABORATORIO
El Químico Farmacobiólogo realizará una siembra de heces sobre una Caja de Petri que contiene un medio de crecimiento. Se vigila el crecimiento, y en caso de existir microorganismos se los identifica mediante microscopía utilizando la tinción de Gram, y posteriormente se le realizarán pruebas bioquímicas a la cepa aislada para poder identificar a la bacteria.
EXAMENES COMPLEMENTARIOS
Por lo general, se realizan los siguientes exámenes para complementar el cultivo:
& Tecnica que se utiliza para casos se emergencias cuando no se tienen otros reactivos a la mano.
& Limitaciones: la solucion de sacarosa atrae moscas, provocando molestias.
METODO DE SALMUERA
Este método basado en la propiedad que tienen lassoluciones de densidad alta, de hacer flotar objetos menos densos, la salmuera de 1.200°, es lo que hace que la mayor parte de huevos de helmintos floten.
DE CONSENTRACION POR SEDIMENTACION CON CENTRIFUGACION
& ES USADO PARA CONCENTRAR HUEVOS, QUISTES Y LARVAS.
& SE MANTIENE LA INTEGRIDAD DE LOS DIVERSOSO PARASITOS
METODOS ESPECIALES
TAMIZADO
& Se considera un metodo mecanico de separacion
& Utilidad: se utiliza para la recoleccion de paraitos o segmentos de estos en la materia fecal.
RECOLECCION PERIANAL Y PERINAL CON CINTA DE CELOFAN ADHESIVO
PERINAL
PERIANAL
ESTA TECNICA SE BASA EN LA BACTERIA ADULTA ETEROBIUS VERMICULARIS DONDE QUEDAN ALMACENADOS SUS HUEVOS EN LA CINTA PUES EMIGRA HACIA ELLA DEPOSUTANDO LOS PARASITOS PARA DESPUES SER ANALIZADOS.
Siembraes el proceso de plantar semillas, con el objetivo de que germinen y se desarrollen plantas. Para que la siembra sea efectiva es importante seleccionar semillas de buena calidad. Las semillas deben ser sanas y estar libres de elementos contaminantes.
La siembra ha sido una necesidad del ser humano desde la edad prehistorica, ya que es la causa del fin del nomadismo y del principio del sedentarismo.
PREPARACION DE LA SEMILLA Y DE LA TIERRA ANTES DE SEMBRAR
Antes de ser sembradas algunas semillas requieren cierta preparación. Este tratamiento puede bien ser escarificación, estratificación, mojado de las semillas o lavado de las semillas con agua fría o tibia.
El mojado de las semillas es por lo general realizado remojando las semillas en agua tibia durante 24 a 48 horas. El lavado de las semillas es muy común en el caso de frutas (ya que la carne de la fruta que rodea la semilla puede ser rápidamente atacada por insectos o plagas. Para limpiar la semilla, por lo general se frota la semilla con un trozo de género o papel, y a veces se procede al lavado de la semilla.Por lo general el lavado de las semillas se realiza sumergiendo las semillas durante unos 20 minutos en agua a una temperatura de 50 °CEl agua tibia a caliente mata los microorganismos que pudieran haber sobrevivido en la superficie de la semilla. Las limpieza con agua a alta temperatura es muy importante en semillas de frutas tropicales que pueden ser infectadas con facilidad como por ejemplo lichis y rambutáns.
PLANTAS QUE SUELEN SER SEMBRADAS
Entre los cultivos que se siembran se destacan la avena, el trigo, y el centeno, los pastos y legumbres son también sembradas de semilla, en tanto el maíz y la soja son plantadas en forma más espaciada. Al plantar, los surcos se encuentran separados unos 70 cm unos de otros, y se intenta espaciar a las semillas individuales; para ello se utilizan diversos dispositivos para disponer las semillas a intervalos exactos, lo cual maximiza el rinde y permite ahorrar semillas.
METODOS DE SIEMBRA
El método de siembra que se pretenda utilizar depende en cierta forma de los
implementos que se tengan, para desarrollar esta actividad, y puede ser siembra manual
o siembra mecánica.
METODO DE SIEMBRA MANUAL
consiste en colocar la semilla en la cama de
siembra con la mano, según la época y el cultivo.
METODO DE SIEMBRA MECANICA
se utilizan sembradoras mecánicas. La
siembra mecánica solo funciona en terrenos planos y los implementos son remolcados
con tractor realizándose con mayor rapidez y aprovechando al máximo el terreno de
cultivo.
FORMAS DE SEMBRADO
La siembra también puede realizarse en forma directa al campo o en forma
indirecta en semilleros, realizándose posteriormente el transplante al campo.
FORMA DE SIEMBRA DIRECTA AL CAMPO:
consiste en depositar la semilla en el
lugar donde se va a desarrollar la
planta , es decir, donde germina y
completa su ciclo productivo. Para ello
las semillas deben guardar el marco de
plantación, que consiste en mantener
las distancias apropiadas que requiera
el tamaño de la planta.
LA SIEMBRA DIRECTA
Cuando la siembra se realiza en forma directa, el suelo deben cuidarse los
siguientes aspectos: Evitar que la semilla se tape con terrones o suelo seco que
dificulten su germinación, debido a la falta de humedad, cuidar que la semilla tenga
agua y aire suficiente, evitar excesos de humedad o anegamiento, ello podría ocasionar
enfermedades a la semilla o a la nueva planta, la falta de humedad también podría
ocasionar muerte por deshidratación a la nueva planta. Otro aspecto que debe cuidarse
es el porcentaje de germinación de la semilla, el tipo de suelo y su fertilidad, por lo que
se recomienda sembrar una cantidad adicional de semilla.
LA FORMA DE SIEMBRA INDIRECTA
se utiliza cuando las plantas necesitan cuidados
especiales en sus primeras etapas, por su delicadeza o mientras alcanzan el tamaño
adecuado para ser ubicados en el sitio definitivo. Es recomendable el uso de semilleros
,principalmente cuando el costo de la semilla es alto y/o haya riesgo de
perder la semilla por ser pequeña. Una vez crecida la plántula, se procede a transplantar
en su lugar definitivo.
DATO IMPORTANTE
Es necesario que algunos cultivos se establezcan en melgas (pequeñas
superficies de tierra separadas por bordes), como son: el arroz, el pápalo, la alfalfa, el
cilantro, entre otros. Para el caso de algunos cultivos como el arroz, es necesario
controlar la humedad ya que es indispensable para su buen desarrollo y producción.
COMO SEMBRAR
CONCLUSION
DIVERSAS SIEMBRAS
siembra es una actividad que consiste en depositar la semilla en la cama de
siembra. Utilizar el mejor método de siembra, aumenta la seguridad de que se tenga
mayor germinación y emergencia de las plantas. El método de siembra que se utilice
dependerá del tipo de vegetal que se desee cultivar.
Al momento de realizar esta actividad se deben tomar en cuanta los siguientes
aspectos: la profundidad de la siembra, la distancia de siembra, la época de siembra,
determinar si la siembra será directa o indirecta, así como la humedad y aireación que
Un medio de cultivo consta de un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación. Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que necesitan un medio que contenga células vivas.
Una placa de agar -- un ejemplo de crecimiento medio bacteriano. Las líneas y los puntos naranjas son colonias bacterianas
ELABORACION DE LOS DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes
complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano.
Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de
carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio
de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que,
en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigación
microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo
y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las
sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para
las reacciones químicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en
forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin
embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de
cultivo provocaban la pérdida de los factores nutritivos lábiles.
Actualmente, la forma más extendida de aportar estas
sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente
fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los
microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales,
tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de
nitrógeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas
por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido
ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales
minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias
promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.
Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos
colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por
sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos
microorganismos.
PRACTICAS BACTEREOLOGIANAS Y NUTRIENTES
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su
consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que
obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a
temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros
tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su
versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo
uso está ampliamente extendido en el laboratorio.
3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera
con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de
variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se
desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones
atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras
los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.
TECNICAS PARA DESARROLLAR UN BUEN CULTIVO
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la
atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas
microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas
condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una
fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de
los cultivos y evitar así que se deseque el medio.
5- Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la
oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el
caso de los microorganismos fotosintéticos.
6-El pH en el Cultivo
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para
el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor
en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos
ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que
no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso
alterar sus procesos metabólicos normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a
temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los
temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas
generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más
cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios.
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente
estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar,
enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los
especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los
medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como
agente esterilizante).
LA EVOLUCION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero
desarrollo como ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y
comienza la observación de los primeros microorganismos, pero es indudable que
la puesta a punto de los medios de cultivo y la utilización del agar como
solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexión en su evolución.
La primera noticia de la utilización de medios de cultivo
nos llega del micólogo Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de
hongos en medios sólidos realizados a base de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias
(por su menor tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizó un
método enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio
líquido.
Koch realizó sus
investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte
nutritivo sólido, pero no tardó en recurrir al caldo de carne líquido, diseñado
por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio sólido
transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las
colonias microbianas.
En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la
microbiología en relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter
Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como
solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a
utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri,
para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se
usaban hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus
investigaciones sobre las bacterias quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y
azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios
selectivos y de enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que
su especial composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de
microorganismos que, en función de sus procesos metabólicos, eran los únicos
capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Würtz impulsó el uso de los medios diferenciales,
incorporando indicadores de pH a la composición de ciertos medios con lo cual se
podía observar la producción de ácidos en la fermentación en ciertos
microorganismos.
TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO
Atendiendo a su estado físico:
SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA).
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración.
2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos,
agregándoles un agente gelificante. Los más utilizados son la gelatina y el
agar. Gelatina: Es una proteína animal obtenida de los huesos. Tiene el
inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y además su uso está
muy limitado porque su punto de fusión es bajo (licúa a temperatura ambiente)
razón por la que no puede utilizarse para cultivos a 37ºC, que es la tempera
óptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar:Es un polímero de
azúcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molécula insoluble enagua
pero soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme entre
32 y 39ºC y nose funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y solidifica una vez
fundido alrededor de los 45ºC. Tiene el inconveniente de que introduce
compuestos orgánicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las
necesidades nutritivas de un microorganismo.
3) Medios semisólidos: Se preparan a
partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una
proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la
investigación de la movilidad de las bacterias
TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO
Atendiendo a su utilidad practica
Medios para aislamientos primarios:
°Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia
variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos
con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros
factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre,
Schaeadler, etc)
°selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se
añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias,
permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia añadidas,
se varía el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey,
Kanamicina-Vancomicina)
°enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora
competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio
con Vitamina K).
°Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas
especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de bacterias,
ayudando a su identificación (Lowenstein).
Medios para identificación:
Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian
las peculiaridades fisiológicas (nutrición y respiración sobre todo) específicas
de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la
identificación de casi cualquier bacteria (Oxidación-Fermentación).
GLOSARIO:
pH:El pH se define como el logaritmo negativo de base 10 de la actividad de los iones hidrógeno.
Microorganismos:Es un ser vivo que solo puede visualizarse con el microscopio.
Celulas: La célula es el elemento de menor tamaño que puede considerarse vivo.
Antibiograma:El antibiograma es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibióticos. Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.
Parasitos: El parasitismo es una interacción biológica entre organismos de diferentes especies animales , en la que una de las especies (el "huésped") ve disminuida su aptitud biológica, en esta relación no se da el caso de que el hospedador salga beneficiado
Se puede obtener la muestra recogiendo las heces en una bolsa plástica adosada a la taza del inodoro o utilizando equipos de recolección comerciales. En caso de bebés se puede adosar la bolsa al pañal. Una vez obtenida la muestra se debe colocarla en un recipiente estéril y derivarla al laboratorio lo más rápido posible.
Este método basado en la propiedad que tienen lassoluciones de densidad alta, de hacer flotar objetos menos densos, la salmuera de 1.200°, es lo que hace que la mayor parte de huevos de helmintos floten.
